韦德官方网站 0514-86166160
您的当前位置:行业资讯

教你快速了解制备型液相色谱

行业资讯

浏览:次 2017-05-20 22:08:33

教你快速了解制备型液相色谱 教你快速了解制备型液相色谱 制备型加压液相色谱,依照色谱柱和样品量的大小,分为:(1)低压液相色谱;(2)中压液相色谱;(3)高压液相色谱;(4)快速色谱。低压、中压与高压液相色谱的压力范围之间会存在1定交叠,没有统1、明确的标准。  1.快速色谱  柱压通常为2bar(或30psi)左右,对那些容易分离的简单混合物,由于快速色谱具有操作简便、经济等优点,常常是实验室的首选。但快速色谱不同于1般的层析分离,这类分离没有压力,而快速分离通常使用瓶装氮气加压,使活动相具有1定的流速,从而缩短了分离时间。  快速色谱使用的柱子1般是玻璃柱,柱直径为3~10cm.长度为7~15cm。快速色谱中使用最广泛的固定相为硅胶。采取的粒径通常为:25~40μm,40~63μm或63~200μm的球形固定相。其它如键合相、氧化铝、聚酰胺吸附 制备型加压液相色谱,依照色谱柱和样品量的大小,分为:(1)低压液相色谱;(2)中压液相色谱;(3)高压液相色谱;(4)快速色谱。低压、中压与高压液相色谱的压力范围之间会存在1定交叠,没有统1、明确的标准。  1.快速色谱  柱压通常为2bar(或30psi)左右,对那些容易分离的简单混合物,由于快速色谱具有操作简便、经济等优轮胎里程试验机点,常常是实验室的首选。但快速色谱不同于1般的层析分离,这类分离没有压力,而快速分离通常使用瓶装氮气加压,使活动相具有1定的流速,从而缩短了分离时间。  快速色谱使用的柱子1般是玻璃柱,柱直径为3~10cm.长度为7~15cm。快速色谱中使用最广泛的固定相为硅胶。采取的粒径通常为:25~40μm,40~63μm或63~200μm的球形固定相。其它如键合相、氧化铝、聚酰胺吸附剂也经常使用作快速色谱的固定相使用。  2.低压色谱(LPLC)  柱压1般低于5bar(或75psi)。  低压色谱1般是由蠕动泵、进样阀和检测器组成,可以连续化,实现自动200吨拉力试验机的梯度淋洗和馏分搜集等操作。色谱柱管1般是玻璃或聚合物材料的,长度1般为240⑷40mm,内径为10⑷0mm。  对大多数在紫外区有吸取的物资,光学检测器很经常使用。填料1压溃强度试验机般使用软质的葡聚糖、琼脂糖、纤维素、合成高聚物或离子交换剂,粒径1般为40⑹0μm。  3.中压液相色谱(MPLC)  柱压在5⑵0bar(或75⑶00土工布拉力试验机psi)中管弯曲试验机之间,广泛用于实验室和工业范围的生物制品(如动物脏器提取液、浓缩液、体液、植物提取液、生物技术发酵液等--常常需要轮滑鞋轮子耐磨试验机经过滤膜作低级净化)的处理,以提取或纯化所需的产品。  中压液相制备色谱的主要部件azsa500盐雾试验机为输液泵、进样阀、检测器、馏分搜集器等,初期的中压液相制备色谱,其输液泵最大流速可达156mL/min,并配有阻尼器,以保证液力学性能试验机流的稳定;进样器配有0.5⑸0mL的不同体积的定量管;检测器有紫外和示差折光检测器,流通池体积比较大,允许大流量活动相通过而无需分流;馏分搜集器有原盘式和排式两种,原盘式的接收管最多达80个,而后者则更多;色谱柱内径9⑴05mm,长度250⑴760mm不等。  对1般中压抑备色谱,当色谱柱直径较大时,柱头常常设计成锥形或有类似于伞状的液流导向结构,使得当大量样品进入到柱头上时,能迅速地分散到全部柱横截面上,及时被活动相冲走,避免了因样品的局金属热疲劳试验机部过浓而引发柱超负荷和谱带加宽。柱子填料则采取比较耐压的交联改性的多糖凝胶(如Sepharose CL,Superose等),聚合物微球,复合材料介质或硬质SiO2基体的化学键合相等,粒径1般在25~40μm(最经试验仪器万能试验机常使用的填料尺寸是15⑵5μm盐雾试验机,25⑷0μm或40⑹3μm),可采取湿法或干法装柱。  4.高压液相色谱(HPLC)  是指柱压1般大于20bar(或300psi)的“高压(或高效)液相色谱”,通常指所用色谱柱的塔板数大于2000,1般是在2,000~20,000的范围之间。  当需要从大量的物资中分离纯化不足1%的所需成份时,分离工作将会10分困难,常常在纯化的最后阶段需要使用10μm不干胶持粘性试手机加速度跌落试验机验机或更小颗粒的高效填料。为取得所需微量组分,夹箱试验机可采取以下分离手段:制备型分离→半制备型分离→分析型分离→产物。为提高每次分离取得纯品的数量,制备型高压液相色谱分离通常在超载情况下运行。  高压液相色谱,即目前钢化玻璃抗冲击性试验机经常使用的高效液相色谱。色谱柱内填装的是粒度范围较窄的微小颗粒固定相(3~30μm),为使活动相流出,需采取较高的压力,同时系统的复杂性及本钱亦增大,但分拉扭复合疲劳试验机辨率可得到较大的提高。而填装较大颗粒的固定相时,如中压液相色谱系统,装柱较容易,柱的通透性较高(只需较低的泵活塞密封环摩模拟运输振动试验机擦磨损试验健身器材综合试验机机压力),可采土工布综合试验机取更大的色谱柱和更经济的仪器,由此分辨率也较低。  5  用分析型高压液相色谱进行制备型分离  当所需纯化合物的量很少时(微克级至几毫克),可用分析型色谱柱进行屡次分离。效果和利用大直径色谱柱进行1次性分离相同。采取小直径色谱柱时,可利用已有的分析型仪器,而无需在色谱柱、填料及附件方面投入更大资金;另外,还可在很大程度上避免由于放大所产生的问题,使分离速度加快。  小直径色谱柱的尺寸1般为250&门开关疲劳试验机t油墨耐磨擦试验机imes;4.6mm,通常装有反相填料,每次可进样5~100ug,通过量次进样分离,可取得足够的纯品。例如,Suzuki等墨层磨擦试验机(1994)报导从豆科植物羽万测试验机扇豆(Lupinus Hirsutus)中分离1羽扇豆优肯拉力试验机生物碱糖苷时,其最后的分离步骤采取LiChrosorb Si60,5μm,250×4.6mm色谱柱进行高压液相色谱分离,洗脱剂为含25%甲醇的yi醚溶液-5%氨水50:1。  常常需用分析型色谱柱进行分离的1个领域是对肽类化合物的纯化。生物活性肽的含量通常很低,用分析型高压液相色谱作为最后的纯化手段时,不会使色谱柱超载。  为了提高分离效力,可将分析型高压液相盐雾综合试验机色谱柱连接起来使用。此时可采取颗粒度在20~30μm的填料,以保持适当的通透性,特别是当使用含水溶剂时。当使用己烷等有机溶剂时,由于活动相的粘度较低,可以使用颗粒度为10μm的填料。  但是由于分析型色谱系统没法提供大范围制备型分离所需的流速,其利用遭到1定限制。
XML 地图 | Sitemap 地图