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淋巴细胞增殖功能的测定实验

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浏览:次 2017-05-22 10:28:57

淋巴细胞增殖功能的测定实验 淋巴细胞增殖功能的测定实验 实验方法原理T细胞、B细胞表面具有辨认抗原的受体和有丝分裂原受体,在特异性抗原刺激下可以使相应淋巴细胞克隆产生增殖。植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(ConA),抗CD2、抗CD3 McAb作为多克隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖;而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC)、脂多糖(LPS,对小鼠有作用)则刺激B细胞产生增殖;美洲商陆(PWM)、肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖均有刺激作用。最近发现,integrin家族中VLA组中某些受体与相应配体结合后也能活化T细胞。目前临床上最常选用PHA刺激PBMC,根据形态学或氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入率测定T细胞的增殖水平。实验材料PBMC试剂、试剂盒闪烁液RPMI1640CO2孵箱仪器、耗材细胞搜集仪β液闪仪实验步骤1. 无菌从肝素抗凝血

实验方法原理
T细胞、B细胞表面具有辨认抗原的受体和有丝分裂原受体,在特异性抗原刺激下可以使相应淋巴细胞克隆产生增殖。植物血凝素(P维卡热变形试验机HA)、刀豆蛋白A(ConA),抗CD2、抗CD3 McAb作为多克泡沫板试验机隆刺激剂可选择性地刺激T细胞增殖;而抗IgM、含葡萄球菌A蛋白的菌体(SAC)、脂多糖(LPS,对小鼠有作用)则刺激B细胞产生增殖;美洲商陆(PWM)、肿瘤刺激剂PMA对T、B细胞的增殖均传动轴抗扭试验机有刺激作用。最近发现,integrin家族中VLA组中某些受体与相应配体结合后也能活化T细胞。铁丝拉伸强度试验机目前临床上最常选用PHA刺激PBMC,根据形态学或氚标记胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)掺入率测定T细胞的PCT高压加老化速寿命试验机增殖水平。

实验材料
PBMC

试剂、试剂盒
闪烁液RPMI1640CO2孵箱

仪器、耗材
细胞搜集仪β液闪仪

实验步骤
1. 无菌从肝素抗凝血中分离外周血单个核细胞(PBMC)洗涤后用10%FCS RPMI1640调阻尼器试验机剂细胞数为1~2×106 /ml
  冲击磨损试验机    2. 加钢板弯曲试验机入96 孔培养板中,1~2×105 细胞/100 μl/孔,每组空气弹簧试验机设3孔。加入最适剂量PHA,100 μl/孔,同时设不加PHA阴性对比。如视察细胞因子(如IL⑵)或其它刺激物(PMA)对增殖功能的调理作用,则根据加入因子的浓度而肯定加入量,1般每孔终究体积为200 μl,37 ℃、5 % CO2孵育,66 h
        3. 每孔链条拉力试验机加入0.5~弹簧疲劳寿命试验机1 μci 3H-T编织带拉力试验机dR(50μ抗压强度试验机l),继续培养6~12 h
         4.塑料拉伸冲击试验机 用DYQ-Ⅱ型多头细胞搜集仪搜钢丝绒耐磨试验机集样品于"9999"型玻璃纤维滤纸上
            5. 烤干后β液闪仪计数
  6. 计算
(1)增气动式跌落试验机殖水平直接用弹簧万能试验机CPM值表示。
低温脆性冲击试验机混凝土快速冻融试验机(2)也可用刺激指数(SI)表示
  PHA(或实验组)cpm-机器本底
SI=──────────曲折试验机─────
  阴性对比组cpm-机器本底
收起

注意事项
1. 注意无菌操作。
  2. PHA、ConA、PWM、LPS等在正式实验前均需摸索最适剂量或亚适剂量。厂家和批号不同丝裂原作用常有很大差油墨耐磨擦试验机别,如Wellcome企业PHA终浓度最适剂量为1~3 &mu滑动轴承试医疗器械拉力试验机验机;g/ml,而广州医工所PHA约为20~100 &mmpm示波冲击试验机u连接器插拔试验机;g/ml。
  3. 根据实验需要,对不同种(人、小鼠、大鼠、兔、狗等)纸张拉力试验机不同来源淋巴细胞(胸腺、脾脏、淋趋承、扁桃腺、外周血等)均应进行最适细胞浓度、圈养时间和刺激物浓度的摸索。

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