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液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障的排除1

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浏览:次 2017-05-31 14:39:20

液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障的排除1 液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障的排除1 液相色谱柱通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的108烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它经常使用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等。本文重点先容反相色谱柱的选择和使用:1、反相色谱柱的选择1.柱子的PH值使用范围 反相柱优点是固定相稳定,利用广泛,可以使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料,使用时1定要注意活动相的PH范围。1般的C18柱PH值范围都在2⑻,活动相的PH值小于2时,会致使键合相的水解;当PH值大于7时硅胶易溶解;常常使用缓冲液固定相要降解。1旦产生上述情况,色谱柱人口处会塌陷。一样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果活动相PH较高或常 液相色谱柱通常分为正相柱和反相柱。正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱;反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的耐火材料实验机108烷基官能团(ODS)称为C18柱,其它经常使用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等。本文重点先容反橡皮酒精耐磨实验拉力拉伸实验机机相色谱柱的选择和使用:
1、反相色谱柱的选择
1.柱子的PH值使用范围
反相柱优点是固定相稳定,利用广泛,可以使用多种溶剂。但硅胶为基质的填料,使用时1定要注意活动相的PH范围。1般的C18柱PH值范高温材料实验机围都在2⑻,活动相的PH值小于2时,会致使键合相的水解;当PH值大于7时硅胶易溶解;常常使用sht4305微机控制电液伺服万能实验机缓冲液固定相要降解。1旦产生上述情况,色谱柱人口处会塌陷。一样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。如果活动相PH较高或常常使用缓冲液时,建议选择PH范围大的柱子,例如戴安企业的Acc橡胶拉压力实验机laim柱PH 2⑼或Zorbax的PH 2⑴1. 5的柱子。
2.填料的端基封尾(或称封口)
把填料的残余硅羟基采取封口技术进行端基封尾,可改良对极性化合物的吸附或拖尾;含碳量增高了,有益于不容易保存化合物的分离;填料稳定性好了,组分的保存时间重现性就好。如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物,最好选用填料经端基封尾的色谱柱。
2、液相色谱柱的使用
色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要依照色谱柱出厂眼睛鼻梁变形实验机报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最好条件),只有这样,测得的结果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、活动相、柱温等条件的差异而有所不同。
1、样品的前处理
a、最好使用活动相溶解样品。
b、使用预处理柱除去样品中的强极性或数显式万能材料实验机与柱填料产生不 可逆吸附的杂质。
c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。
2、活动相的配制
液相色谱是样品组分在柱填纸板抗压实验机料改变力实验机与活动相之间质量交换而到达分离的目的,因此要求活动相具有以下的特点:
a、活动相对样品具有1定的溶解能力,钢瓶水压实验机保证样品组分不会沉淀在柱中(或长时间保存在柱中)。
b、活动相与样品不产生化学反应
c、活动相的黏度要尽可能小,以便得到好的分离效果;下降柱压降,延长泵的使用寿命(可应用提高温度的方法下降活动相的黏度)。
d、活动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器,最好使用对紫外吸取较低的溶剂配制。
e、活动相沸点不要太低,否则容易产生气泡,致使实验没法进行。
f、在活动相配制好后,1定要进行脱气。除去溶解在活动相中的微量气体既有益于检测,还可以避免活动相中的微量氧与样品产生作用。
3、活动相流速的选择
因柱效是柱中活动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效。对1根特定的色谱柱,要寻求最好柱效,最好使用最好流速。对内径为4.6mm的色谱柱,流速1般选择1ml/min,对内径为4.0mm柱,流速0.8ml/min为佳。
当选用最好流全电脑式多功能拉压强度实验机速时,分析时间可能延长。可采取改变活动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱皮箱振荡冲击实验机时,可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
注意:
a.含水活动相最好在实包装纸箱耐压实验机验前配制,特别是夏天使用缓冲溶液作为活动相不要过夜。最好加入叠氮化钠,避免细菌生长。
b.活动相要皮革剥离强度实验机求使用0.45 μm滤膜过滤,除去微粒杂质。
c.使用HPLC级溶剂配制活动相,使用适合的活动相可延长色谱柱的使用寿命,提高柱性能。、
3. 色谱柱的保护
1. 色谱柱的平衡
反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的腐蚀实验机。新柱应先使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请1定确保您分析样品所使用的活动相和乙腈/水互溶。 数控弹簧实验机每天用足够的时间以活动相来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面取得最大的"补偿",而且您的色谱柱的寿命也会变得更长!操作步骤:
a. 平衡开始时将流速缓慢地提高,用活动紫外耐气候实验机相平衡色谱柱直到取得稳定的基线(缓冲盐或离子对试剂流速如果较低,则需要较长的时间来平衡)
b. 如果使用的活动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐活动相平衡; 分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲初粘力实验机盐さ鹿俜酵倔再用甲醇冲洗200吨拉力实验机30分钟保护柱子。
2. 色谱柱的再生
长时间使用的色谱柱,常常柱效会降落(柱子的理论塔板数减低)。橡胶密封条磨耗实验机可以对色谱柱进行再生,在有条件的地板覆盖物耐脚轮磨耗实验机实验室应使用1个便宜的泵进行柱子的再生。
建议用来冲洗柱子的溶剂体积
色谱柱尺寸 柱电线加热变形实验机体积 所用溶剂的体积
125⑷mm 1.6ml 30ml
250⑷ mm 3.2ml 60ml
250⑴0mm 20m纺织品水平燃烧实验机l 400ml
选择再生方法:
极性固定相(如Si,NH2* ,DIOL基色谱填料)的再生:
正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水**
非极性固定相(如反冲击震动淋雨燃烧实验机相色谱填料RP-18,RP-8,CN等)的再生: 水→乙腈→氯仿(或异丙醇)→乙腈→恒应力万能实验机水
注意:
a. 在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能以铵根离子的情势存在,因此应当在水洗后用0.1M的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出。
b. 0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱,如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效。</P>
3. 色谱柱的保护
a.使用预柱保护分析柱(硅胶在极性活动相/离子性活动相中有1定的溶解度)
b.大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽可能不超过该色谱柱的pH范围
c.避免活动相组成及极性的剧烈变化
d.活动相使用前必须经脱气和过滤处理
e.如果使用极性或离子性的缓冲溶液作活动相,应在实验终了柱子冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中
f.氯化物的溶拉链往复疲劳实验机剂对其有1定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接收内不能长时间存留此类溶剂,以免腐蚀
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